摘要： 维生素B1又名硫胺素，在植物性食物中分布极广，谷类种子表皮中含量更为丰富， 麦麸、酵母、米糠等均是维生素B1的良好来源。检测其含量也有着许多的方法。其中荧光分光光度法是对荧光物质进行定性和定量的有效方法，它是维生素B1含量测定的一个比较常用的方法。
本文以测定食品中维生素B1（硫胺素）元素含量为例，依据GB/T5009. 84-2003《食品中硫胺素（维生素B1 ）的测定》，应用港东F-380型荧光分光光度计对维生素B1含量进行测定。结果证明此方法操作简便，线性良好是测定维生素B1含量的理想方法。
关键词： 荧光分光光度法 维生素B1硫胺素食品
原理
硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外线照射下，噻嘧色素发出荧光。在给定的条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，此荧光之强度与噻嘧色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。
实验条件
仪器及附件：
天津港东 F-380 型荧光分光光度计
荧光石英比色皿
分析条件：
激发波长：365nm
发射波长：435nm
药品：
正丁醇、无水硫酸钠、淀粉酶、盐酸、乙酸钠、氯化钾 、氢氧化钠 、铁氰化钾 、乙酸 、硫胺素标准储备液（0.1mg/mL）等。
其它：
分析天平（0.0001g） 、容量瓶、盐基交换柱（填充活 性人造沸石） 、三角瓶、移液管、具塞比色管、擦镜纸、磁力搅拌器、pH计等。
样品及标准样品的制备
样品溶液的制备：
（1）样品提取
（2）提取液净化
（3）净化液氧化 （避光暗环境）
标准溶液的制备：
（1）硫胺素标准储备液（0.1mg/mL）：
精确称取100mg经氯化钙干燥24小时的硫胺素，溶于0.01mol/L盐酸中，稀释至1000mL。(于冰箱中避光保存）。
（2）硫胺素标准中间液（10μg/mL）：
取10mL硫胺素标准液，用0.01mol/L盐酸稀释至100mL于冰箱中避光保存。
（3）硫胺素标准使用液（0.1μg/mL）：
将硫胺素标准中间液用水稀释用水稀释至100倍，用时现配。
标准曲线待测液
（1）标准溶液
将20mL硫胺素标准使用液（0.1μg/mL）加入交换柱以代替样品提取液，即得到标准净化液。(做三份)
（2）标准待测液
进行标准净化液的氧化过程，得到标准空白溶液A、标准溶液B（各三份，用作平行）。
计算公式
X——试样中硫胺素含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；
U——试样荧光强度；
Ub——试样空白荧光强度；
S——标准荧光强度 ；
Sb——标准空白荧光强度；
c——硫胺素标准使用液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
V——用于净化的硫胺素标准使用液体积，单位为毫升（mL）；
V1——试样水解后定容之体积，单位为毫升（mL）；
V2——试样用于净化的提取液体积，单位为毫升（mL）；
m——试样质量，单位为克（g）；
——试样含量由微克每克（μg/g）换算成毫克每百克（mg/100g）的系数
测定结果
应用港东F-380型荧光分光光度计的“光度测定”模块，分别读取待测溶液的荧光强度，根据计算公式得到样品维生素B1 的含量。
结论
采用荧光分光光度法测定维生素B1含量，操作简单，方法准确，是一种理想的方法。
由于维生素B1待测液遇光不稳定， 因此实验对仪器的功能要求高。港东F-380型荧光分光光度计率先在硬件上采用了激发侧挡光快门的设置，从而避免了样品被强光的直接照射，使整个实验操作简便，结果重现性良好。
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Printed in CHINA, September 1, 2011
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