摘要： 荧光分光光度法是对荧光物质进行定性和定量的有效方法。目前国家标准对于测定海洋生物体重石油烃含量的方法有着明确的规定，即GB 17378.6-2007《海洋监测规范 第六部分：生物体分析》——13.石油烃 荧光分光光度法。此方法属于仲裁方法。
本文依据国家GB 17378.6-2007内容，应用港东F-380型荧光分光光度计对海洋生物体中石油烃含量进行测定。结果证明此方法操作简便， 线性良好是测定海洋生物体中石油烃含量的理想方法。
关键词： 荧光分光光度法 海洋生物体 石油烃
原理
生物样品经氢氧化钠皂化， 用二氯甲烷萃取。将萃取液 中的二氯甲烷蒸发后， 残留物用石油醚溶解， 于激发波长 310nm，发射波长360nm处进行荧光分光光度测定。
实验条件
1、仪器及附件：
天津港东 F-380 型荧光分光光度计
荧光石英比色皿
2、分析条件：
激发波长：310nm
发射波长：360nm
3、药品：
20#标准油（国家环境保护总局） 、活性炭（60目）、石 油醚（沸点范围： 60～90℃） 、无水乙醇（重蒸馏）、氯化 钠（饱和溶液） 、氢氧化钠（优级纯）、盐酸、二氯甲烷 （重蒸馏）等。
4、其它：
分析天平（0.0001g） 、容量瓶、三角瓶、移液管、烧 杯、具塞比色管、擦镜纸、玻璃层析柱、皂化瓶、锥形分液
漏斗、旋转蒸发器等。
标准曲线及样品测定
1、标准曲线制备
（1）标准曲线制备流程图
（2）具体步骤
① 移 取：分别量取0mL、0.10mL、0.30mL、0.50mL、0.70mL、0.90mL油标准使用液（100μg/mL）于100mL皂化瓶 中；
② 皂 化：向上述皂化瓶中加入20mL氢氧化钠溶液（6mol/L），室温下避光皂化8～12小时，然后加入20 mL无水乙醇溶液（重蒸馏），充分摇匀；
③ 分 液：4小时后将皂化液转入500mL分液漏斗中，用10mL二氯甲烷（重蒸馏）洗涤皂化瓶，洗涤液转入分液漏斗中，加30mL氯化钠溶液和100mL水，振荡3min后静置分层；
④ 旋转蒸发：将有机相收集与旋转蒸发瓶中，用10mL二氯甲烷溶液再萃取一次，合并有机相，于50℃水浴中将二氯甲 烷蒸发至0.5mL；
⑤ 收集待测：取下蒸发瓶用氮气将残留的有机溶剂吹干，准确加入10.0mL脱芳石油醚溶解残留物。
2、标准曲线的建立
设置激发波长310nm， 发射波长360nm， 分别测试标准溶液待测液的荧光强度， 以相对荧光强度Ii-空白荧光强度I0为纵坐 标，石油烃含量（μg/mL）为横坐标建立工作曲线。
3、样品的制备及测定
（1）样品制备流程图
① 样品前处理：烘干或冷冻干燥（对类脂物含量高的生物样品）；
② 以相同的步骤同时制备分析空白样品。
测定结果
应用F-380型荧光分光光度计的“光度测定”模块建立石油烃的标准工作曲线，并进行样品测定。
结论
采用荧光分光光度法测定海洋生物体中石油烃的含量，操作简单，方法准确，是一种理想的方法。
由于石油烃标准溶液在测试过程中需要进行样品的背景扣除， 因此实验对仪器的功能要求更高。港东F-380型荧光分光光 度计率先在软件上采用了独特的双背景扣除功能，自动计算石油烃的浓度，使整个实验操作简便，结果重现性良好。
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Printed in CHINA, September 1, 2011
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